關鍵詞：發(fā)酵生產(chǎn) 菌種 菌種培養(yǎng)液 污染 細菌 真菌 污染現(xiàn)象 污染源 污染程度 清潔消毒 環(huán)境 措施

菌種培養(yǎng)液是菌種培養(yǎng)經(jīng)檢測合格后用于發(fā)酵生產(chǎn)或分離選育工作的重要原材料。當菌種培養(yǎng)液發(fā)生污染后，不僅會影響正常的生產(chǎn)進程，使原材料的投入及生產(chǎn)成本增加，還會增加選育工作的時間，無法按計劃選出優(yōu)秀菌種。因此，當發(fā)現(xiàn)菌種培養(yǎng)液被污染后，需要進行系統(tǒng)的調(diào)查以確定污染源和污染程度，進而采取相應的措施。

一、污染現(xiàn)象的初步觀察

1.肉眼觀察：首先觀察培養(yǎng)液的顏色、透明度、是否變渾濁或產(chǎn)生沉淀物、是否有泡沫等異?，F(xiàn)象。細菌污染常導致培養(yǎng)液變渾濁，真菌污染在顯微鏡下會觀察到菌絲或菌團?？梢匀∩倭颗囵B(yǎng)液進行涂片染色，在顯微鏡下觀察是否有細菌、真菌或其他微生物的存在。這有助于初步判斷污染的種類。

2.氣味：正常生長的菌種培養(yǎng)液有其固有的氣味，每個菌種培養(yǎng)液氣味不同，如果培養(yǎng)液染菌會散發(fā)出與正常氣味不同的刺激性氣味。

3.PH檢測：被細菌污染的培養(yǎng)液PH較正常培養(yǎng)液的檢測數(shù)值會有所下降；真菌污染的培養(yǎng)液PH會有所上升。

圖示為菌種培養(yǎng)液

二、污染源的追溯

1.操作過程審查：回顧整個操作過程，檢查是否有不遵循無菌操作規(guī)程的情況，如無菌服穿戴不合格、手套更換不及時、工作臺面及潔凈區(qū)環(huán)境消毒不及時等。

2.器皿檢查：檢查使用的培養(yǎng)器皿、接種鏟等器具是否經(jīng)過清潔和滅菌。特別是長時間未使用的器具，可能存在污染風險。

3.培養(yǎng)基檢查：檢查培養(yǎng)基的制備過程是否符合規(guī)程，包括配制比例、包扎過程、滅菌溫度、滅菌時間、pH值等條件是否控制得當。同時，檢查培養(yǎng)基及原材料的保存條件，避免長時間暴露在空氣中，一些糧食類原材料需低溫保存，避免原材料發(fā)霉變質(zhì)。

4.實驗室環(huán)境評估：檢查通風系統(tǒng)是否正常運行，空氣過濾裝置是否定期更換，實驗室是否定期清潔消毒等。

5.人員衛(wèi)生狀況：檢查操作人員是否遵守個人衛(wèi)生習慣要求，如是否認真穿戴實驗服、戴口罩、頭套等。

三、污染程度的評估

1.觀察檢測：取少量培養(yǎng)液涂片放于顯微鏡下觀察，如污染培養(yǎng)液的是細菌，可用革蘭氏陽性/陰性染液染色，觀察染色后的細胞數(shù)量多少；如污染培養(yǎng)液的是真菌，可觀察菌絲或菌團的數(shù)量多少及大小，以此判斷污染程度。

2.培養(yǎng)檢測：將疑似污染的培養(yǎng)液在無菌條件下接種到無菌培養(yǎng)基上，放入培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)觀察。根據(jù)培養(yǎng)結果（如菌落的顏色、形態(tài)、大小等）判斷污染的程度和種類。細菌的菌落通常呈較小的圓形，真菌菌落較大，且表面有孢子。

3.生化指標檢測：對培養(yǎng)液進行生化指標檢測，如pH值、營養(yǎng)成分含量、氧化還原電位等，以評估污染對培養(yǎng)液質(zhì)量的影響。

圖示為無菌培養(yǎng)基上的細菌菌落

圖示為無菌培養(yǎng)基上的真菌菌落

四、應對措施

1.隔離污染源：一旦發(fā)現(xiàn)污染，應立即將受污染的培養(yǎng)液、器皿等隔離處理，避免污染擴散。對受污染的培養(yǎng)液經(jīng)高溫滅菌或用消毒劑處理后送環(huán)保處處理，受污染的器皿經(jīng)多次高溫滅菌或用消毒劑浸泡檢測合格后再投入使用。

2.消毒與清潔：對受污染的區(qū)域進行消毒和清潔，包括工作臺面、設備、空氣過濾裝置、實驗室環(huán)境等。人員在操作前應嚴格按照要求對自身尤其是手部進行清潔，并按規(guī)定穿戴好防護用品。

3.重新培養(yǎng)：在確認污染已經(jīng)清除后，使用新的、經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基和器皿重新進行菌種培養(yǎng)。培養(yǎng)基應定期配制，防止因放置時間過長而發(fā)生污染。

4.記錄與總結：詳細記錄污染事件的全過程，包括污染源、污染程度、應對措施等。同時，總結經(jīng)驗教訓，制定改進措施，嚴格按規(guī)程操作，防止類似事件再次發(fā)生。

五、專業(yè)檢測與咨詢

如果污染情況復雜或難以處理，建議尋求專業(yè)檢測機構的幫助。檢測機構通常擁有先進的檢測技術和設備，能夠準確判斷污染的種類和程度，并提供相應的解決方案。此外，也可以咨詢經(jīng)驗豐富的科研人員或?qū)＜?，以獲得更具體的指導。