細(xì)胞培養(yǎng)中

微生物案例

微生物檢測實(shí)驗(yàn)室反饋：

使用熱滅菌方式無法殺滅耐熱菌，芽孢有殘留。

導(dǎo)致培養(yǎng)基內(nèi)毒素超標(biāo)，將影響細(xì)胞培養(yǎng)效果和

微生物的培養(yǎng)效果。

細(xì)胞培養(yǎng)中，培養(yǎng)體系中可能會

受到內(nèi)毒素的干擾。生物實(shí)驗(yàn)室中，

內(nèi)毒素主要來自于各類配試劑所用的水、

各類培養(yǎng)基、血清及其他添加劑、實(shí)驗(yàn)器皿表面等。

內(nèi)毒素更像是一個(gè)“隱形的殺手"，

日常實(shí)驗(yàn)中不顯山不露水，

關(guān)鍵時(shí)刻很可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成“致命一擊"，

導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差，影響實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性。

收藏幾類情況更應(yīng)關(guān)注內(nèi)毒素的影響：

1、養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)，干細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感，如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí)，干細(xì)胞很容易死亡。

2、養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí)，過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。

3、基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài)，任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑，都會讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘，謬以千里"。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí)，選擇極低的內(nèi)毒素（最好≤1EU/ml），對實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

4、原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染，或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增，這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此，挑選更低的內(nèi)毒素，是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。

5、實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞，需要長期培養(yǎng)、長期凍存，或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的，血清會經(jīng)常或長時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康，都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清，以避免內(nèi)毒素長久對細(xì)胞的毒性影響。

總之，控制培養(yǎng)基內(nèi)毒素水平是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確和可靠的重要環(huán)節(jié)。通過選擇合適的培養(yǎng)基成分、嚴(yán)格的無菌操作和合理的培養(yǎng)條件，以及定期檢測培養(yǎng)基內(nèi)毒素水平，可以最大限度地減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生，保證實(shí)驗(yàn)的可靠性。